淋巴細胞分離液操作規范
為確保淋巴細胞分離液的有效使用,保障實驗結果的準確性和操作人員的安全,以下列出淋巴細胞分離液的基本操作規范:
1、樣本準備:使用新鮮抗凝全血,抗凝劑可選EDTA、枸櫞酸鈉或肝素。將血液樣本與等體積的生理鹽水或PBS稀釋,以減小紅細胞凝集,提高分離效果。
2、分離液使用:將
淋巴細胞分離液恢復至室溫后,輕輕搖勻。根據樣本體積,在離心管中加入適量的分離液(通常為樣本體積的1-2倍)。注意,分離液與樣本的總體積不應過離心管容量的三分之二。
3、樣本加樣:使用移液管或巴氏吸管,將稀釋后的血液樣本緩慢加至分離液上層,避免兩者混合,形成清晰的分層界面。
4、離心操作:在室溫下,以適當的離心力(如500-1000g)離心20-30分鐘。離心過程中,紅細胞和粒細胞會沉降到底部,淋巴細胞則聚集在分離液與血漿的界面處,形成一層白膜。
5、細胞收集:離心結束后,小心吸取白膜層至新的離心管中,避免混入紅細胞和分離液。隨后,用生理鹽水或PBS洗滌細胞,去除殘留的分離液和血小板。
6、后續處理:洗滌后的淋巴細胞可根據實驗需求進行計數、培養或其他處理。注意在整個操作過程中保持無菌,避免細胞污染。